Octet 分子相互作用技術平臺
ForteBio公司的Octet分子 相互作用技術平臺包括儀器、生物傳感器和相應試劑盒,是一種免標記的,實時監(jiān)測的先進技術,主要用于生物分子間相互作用動力學參數(shù)以及蛋白濃度的測定。該平臺通過浸試即讀的監(jiān)測方式(Dip and ReadTM)來提高了檢測通量,簡單易學并有利于優(yōu)化操作流程,使得用戶能在數(shù)分鐘內(nèi)就可以獲得大量的可靠數(shù)據(jù)。在很多的應用領域中,這種技術平臺可以作為ELISA,HPLC以及SPR技術分析方法的有效替代手段。
Octet系統(tǒng)的蛋白濃度定量和生物分子間相互作用動力學參數(shù)測定(Ka,Kd和KD),可以為早期研發(fā)過程提供重要的信息;同時,它的高通量優(yōu)點可以大大節(jié)省研發(fā)的時間。它不僅可以運用于早期的研發(fā)和篩選以及晚期的臨床試驗,還可以用于生產(chǎn)監(jiān)控和質(zhì)量監(jiān)控。正是因為Octet平臺不需要微流體控制系統(tǒng),所以可以適用于粗樣品檢測;它的高通量特性使得其適用于抗體和化合物庫的篩選。
BLI非標記檢測能跟蹤檢測溶液中分子與生物傳感器之間的結(jié)合,解離整個過程的變化。同一平臺,多種應用:
二、Octet 分子相互作用技術平臺--抗體和其他蛋白的定量
Octet平臺可以對抗體和其他蛋白進行快速濃度測定,這使得該平臺可以用于表達庫的篩選、上游與下游的生產(chǎn)過程控制盒生物學治療中生物標記物的濃度定量測定。
· 測定結(jié)果與HPLC有很好的可比性,精密度優(yōu)于ELISA。
· 15分鐘左右可以測定96個樣品的濃度
· 直接測定的形式,不需要標記和其他試劑
· 不需要繁瑣的純化工程,可以直接測定諸如培養(yǎng)上清等粗樣品
· 可以提供定制服務,根據(jù)用戶需要制作特殊的生物傳感器
三、Octet 分子相互作用技術平臺--更快更準的ELSA測定
與ELISA相比,Octet平臺自動化程度高,測定的速度快,而且可以獲得更豐富更準確的數(shù)據(jù),可以運用于藥代動力學和生物學治療中生物標記物的測定。
· 高靈敏度的2步法和3步法測定
· 測定條件可以在幾個小時內(nèi)進行優(yōu)化
· 測試可以在3小時內(nèi)結(jié)束,不要進行過夜包被
· 全自動系統(tǒng),不需要洗滌步驟,節(jié)省了時間并減少了人為誤差
· 實時的相互作用數(shù)據(jù)比ELISA所用的終點判定法可以提供諸如解離常數(shù)等更多的信息。
· 可以檢測到ELISA檢測不到的更弱的結(jié)合
四、Octet 分子相互作用技術平臺--功能篩選及定性分析
Octet系統(tǒng)提供了存在于粗樣品中的單抗和抗原間的快速的檢測方法。這樣可以為抗體藥物的篩選、過程優(yōu)化以及疫苗的研發(fā)中盡早提供重要的信息,幫戰(zhàn)客戶盡早作出判斷。
· Ka,Kd和KD 等動力學參數(shù)的研究
· 親和力參數(shù)的測試范圍從mM到pM級別
· 科技檢測血清或者細胞裂解上清等樣品
· 抗原表位鑒定和配對抗體篩選-在6個小時內(nèi)可以做34×34個反應
· 可以同時測定8個(96孔板)或者16個樣品(96孔板或384孔板)
· 可以測定膜蛋白和病毒顆粒的動力學參數(shù)
五、Octet 分子相互作用技術平臺--小分子化合物和分子片段篩選
Octet系統(tǒng)可以快速的檢測小分子化合物,實現(xiàn)從化學靶物到先導化合物(hit to lead)的檢測
· 非標記檢測大于150Da化合物
· 提供高質(zhì)量的動力學參數(shù),包括Ka,Kd以及穩(wěn)態(tài)KD
· 快速化合物庫篩選——8個小時內(nèi)檢測1000個化合物
· 不需要進行容積校正——Octet系統(tǒng)可以耐受高濃度的DMSO
· 多功能的軟件使得數(shù)據(jù)分析更簡單,高通量的流程更簡潔
Octet 分子相互作用技術平臺--技術優(yōu)勢
良好的性能——非??煽康?,高質(zhì)量的數(shù)據(jù)
· 免標記,實時監(jiān)控
· 具備HPLC的準確性
· 比ELISA更好的精密度
· 與SPR和ITC方法的檢測的結(jié)果一致
· 可以檢測粗樣品,比如高粘度的液體,低溶解度的分析物
簡單——容易學習和操作
· 2小時內(nèi)就可以掌握
· 全自動的操作平臺
· 無需微流控系統(tǒng),不需要專業(yè)的維護和操作人員
· 眾多不同種類的生物傳感器可以滿足不同的需要
· 直觀的操作和分析軟件
快速——更快地知道結(jié)果,高通量
· 對96個樣品進行濃度檢測只要15分鐘
· 篩選1000種化合物在6個小時內(nèi)完成
· 多步法ELISA檢測在3個小時內(nèi)完成
· 96孔和384孔的加樣形式
· 可以與自動化工作站兼容
效率——高效的操作流程,便宜的成本
· 在數(shù)小時內(nèi)建立檢測方法
· 粗樣品不需要純化,可以直接檢測
· 寬泛的檢測范圍,樣品可以不用稀釋,增加準確性
· 生物傳感器可以多次再生
· 非破壞性樣品檢測,樣品可以回收利用
· 樣品耗用量極低
BLI基本原理
Octet系統(tǒng)所運用的生物膜干涉技術,是一種免標記技術,實時提供高通量的生物分子相互作用信息。該儀器發(fā)射白光到傳感器表面并收集反射光,不同頻率的反射光譜受到生物傳感器的光膜層厚度的影響,一些頻率的反射光形成了相長干涉(藍色),而另一些受到了相消干涉(紅色)。這些干涉被光譜儀所檢測到,并形成一幅干涉光譜,并以干涉光譜的相位位移強度(nm)顯示。因此,結(jié)合到傳感器表面的分子一旦有數(shù)量上的增減,光譜儀變會實時地檢測到干涉 光譜的位移,而這種位移直接反應出傳感器表面生物膜的厚度。
生物膜干涉技術的優(yōu)點
· 可以獲取生物分子相互作用的高質(zhì)量的數(shù)據(jù)
· 直接作用的檢測方式,可免去標記和信號放大步驟
· 實時監(jiān)控可以對相互作用進行動力學分析
· 良好的反應特異性,即使在粗樣品中
· 適用于非常廣泛的不同物質(zhì)分子
短短數(shù)年,全球已有超過300家用戶選擇Fortebio Octet平臺,并發(fā)表了超過100篇的文獻。在中國,國家抗體中心、中科院、華東理工大學、藥明康德、諾華等不同領域的用戶,正在使用這項創(chuàng)新的技術。